七色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔鼠通用二抗）

原理介绍: 

酪酰胺信号放大(TSA ，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶 蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的 DAB 显色方法  ，TSA 技术同样采用 HRP 标记的二 抗，同样有对应的“显色 ”步骤（HRP 催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底 物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法或者抗体洗脱液洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP 复合物，重复下一种一抗-hrp 二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧 光素底物，如此往复就可实现多重标记。 TSA 详细原理是利用酪胺 Tyramide 的过氧化物酶反应(酪胺盐在 HRP 催化 H202 下形成共价键结合位 点) ，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在 抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到 10- 100 倍增强。简单来说，用这种方法 做多重免疫荧光是利用二抗上带有的 HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧 光素。荧光素在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧 光素稳定结合。然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧 光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧 光素都结合好后，最后去检测结果。 由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应， 以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。也就是说，如果用 TSA 技术，同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。搭配同一支抗兔的 HRP 二抗就可以 进行实验，而且信号放大的倍数大大增强。本公司开发的试剂盒具体酪胺荧光染料为以下其中一种或者多 种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。此试剂盒中的荧光染料可单独或配合使用。可以实现单标、双标、三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光标记等功能，极大丰富了此试剂盒的内涵。

试剂盒组分：

试剂盒使用简要流程：（详细操作步骤请参见技术文档——多重免疫荧光实验流程）

使用慧蓝生物多重荧光染色Plus试剂盒成像示例：

（A）人输卵管组织指标A（570黄）＋指标B（520绿）＋指标C（690粉）；

（B）小鼠肾组织指标A（570黄）＋指标B（520绿）＋指标C（690粉）;

（C）人胃癌肿瘤指标A（690粉）＋指标B（620红）＋指标C（570黄）＋指标D（520绿）;

（D）人肠组织指标A (570黄)＋指标B (520绿) ＋指标C(690粉) ＋指标D(620红) ＋指标E(480青)。

【近年用慧蓝试剂盒发表的文章】
[1] Wang X, Liao J, Shi H, Zhao Y, Ke W, Wu H, Liu G, Li X, He C. Granulosa Cell-Layer Stiffening Prevents Escape of Mural Granulosa Cells from the Post-Ovulatory Follicle. Adv Sci (Weinh). 2024 Jul 1:e2403640. doi: 10.1002/advs.202403640. Epub ahead of print. PMID: 38946588.
[2] Liu ZQ, Dai H, Yao L, Chen WF, Wang Y, Ma LY, Li XQ, Lin SL, He MJ, Gao PT, Liu XY, Xu JX, Xu XY, Wang KH, Wang L, Chen L, Zhou PH, Li QL. A single-cell transcriptional landscape of immune cells shows disease-specific changes of T cell and macrophage populations in human achalasia. Nat Commun. 2023 Aug 4;14(1):4685. doi: 10.1038/s41467-023-39750-5. PMID: 37542039; PMCID: PMC10403544.
[3] Wang N, Jiang Y, Li M, Wang H, Pan J, Tang Y, Xie S, Xu Y, Li X, Zhou X, Xu P, Lin W, Wang X. Protein Kinase STK24 Promotes Tumor Immune Evasion via the AKT-PD-L1 Axis. Adv Sci (Weinh). 2024 Mar;11(12):e2304342. doi: 10.1002/advs.202304342. Epub 2024 Jan 16. PMID: 38229183; PMCID: PMC10966517.

Plus版浓缩型染料多重免疫荧光实验流程