基因敲入细胞定制

  技术简介

    利用CRISPR/Cas9技术，针对靶基因设计，构建相应的Cas9/sgRNA和Donor质粒，将Cas9/sgRNA和Donor质粒共转染目的细胞，通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因靶位点进行切割，引起DNA双链断裂（Double-strand breaks DSB),通过细胞自身的同源重组修复（Homology -directed  repair  HDR)途径，将Donor中的外源基因定点敲入到目的细胞的基因组中。

应用范围

方案选择

应用案例

 19-28z（CAR）片段敲入TRAC位点目的细胞株的构建（引自：Eyquem J,et al., Nature  ,2017)。

利用CRISPR/Cas9技术，用病毒感染目的细胞，将病毒中包含的目的序列（19-28z)整合入TRAC基因组中，19-28z受TRAC内源启动子调控，可以转录翻译成CAR蛋白，同时19-28Z敲入阻断TRAC转录翻译成TCR蛋白。通过流式分选，筛选CAR表达阳性且TCR表达阴性的细胞，得到19-28z（CAR)片段敲入的目的细胞株。

项目流程与周期

交付标准